Полимеразная цепная реакция, а попросту ПЦР на гепатит С — современная методика диагностики вирусного воспаления печени. У болезни есть разновидности. Известны, к примеру, инфекции А и В типов. Их симптоматика явная. Гепатит С, напротив, протекает скрытно, даже на острой стадии развития. ПЦР — надёжный способ ранней диагностики. Анализ позволяет подтвердить присутствие вируса в организме.
История применения полимеразной цепной реакции
Анализ ПЦР на гепатит стал общепринятым, стандартизированным в конце прошлого века.
До этого пройдены следующие этапы развития полимеразной диагностики:
- В 1970-х годах Хьелль Клеппе из Норвегии стал проводить эксперименты по увеличению фрагментов ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты). Её учёный удлинял при помощи праймеров. Так называют искусственные короткие нуклеиновые кислоты. Ввиду недостаточной изученности и неполной расшифровки строения ДНК, опыты Клеппе «не вышли» из стен лаборатории.
- В 1985 году в американском научном журнале появилась статья Кэри Мулисса. Он описал принципы проведения анализа с помощью многократного удвоения фрагментов исходного ДНК. В итоге Кэри Мулисса удостоили Нобелевской премии. Учёный получил её в 1993 году.
- Первоначально исследование проводилось при постоянном добавлении ДНК-полимеразы. Требовался нагрев. Высокие температуры распрямлялицепь ДНК. При этом полимераза инактивировалась, то есть становилась неактивной в реакции. Поэтому первая версия ПЦР была малоэффективной, требовала много времени и материалов.
- В 1986 году процедуру проведения анализа изменили. Стали использовать ДНК-полимеразу, полученную из термофильных бактерий. Такой материал устойчив к высоким температурам. Уменьшилось время проведения анализа, повысилась его точность и появилась возможность автоматизировать процесс.
Первоначально метод был запатентован. Права принадлежали компании «Хофман-Ла Рош». С 90-х годов прошлого века проведено несколько судов. К 2005 году истцамудалось заставить «Хофман-Ла Рош» отказаться от патента. Так ПЦР стала доступна для всех.
Суть анализа и механизм его проведения
В общих словах ПЦР — многократное копирование участков ДНК или РНК (рибонуклеиновой кислоты). «Размножают» заранее определённый фрагмент.
Для проведения исследования требуются:
- предназначенный для репликации характерный участок РНК гепатита С,
- два типа синтетического праймера,
- катализатор реакции, коим служит ДНК-полимераза,
- буферный раствор,
- ионы магния,
- высококипящее масло.
Во время анализа на выявление возбудителя гепатитаили других инфекционных заболеваний проводят 20-35 циклов.
В каждом из них последовательно повторяется 3 операции:
- Вначале материал возбудителя нагревают минимум до 90 градусов. В это время цепочки ДНК начинают разворачиваться.
- Следующая операция — отжиг, проводится при температуре 60-72 градуса. В этих условиях начинают работать праймеры.
- На заключительном этапе добавляется ДНК-полимераза, которая реплицирует матричную цепь.
Каждая операция длится определённое время. Денатурация или нагрев проводится на протяжении минимум 2 минут. Самая короткая операция отжига выполняется за 30 секунд. Последняя стадия самая длительная, может занять 7—10 минут.
Виды ПЦР
С помощью ПЦР на гепатит выявляют возбудителя вирусного воспаления печени. Однако анализ востребован и при выявлении отцовства. Также исследование используется в криминалистике.
Если предстоит диагностика гепатита С, врачи используют несколько разновидностей анализа ПЦР:
- Качественный анализ на гепатит. Исследование показывает наличие или отсутствие вируса в крови. У качественного исследования есть настройки чувствительности. Если патогена в крови менее 10МЕ (международных единиц) на миллилитр, результат исследования отрицательный. Верхняя граница чувствительности равна 500 МЕ на миллилитр.
- Гепатит С количественный анализ. Его ещё называют исследованием на определение вирусной нагрузки. Определяют число РНК вируса гепатита C. Количественный анализ тоже проводится на 1 миллилитре крови пациента.
Качественный анализ проводится перед-, либо во время лечения. С помощью исследования врачи находят ответ на 3 вопроса. Во-первых, определяется степень риска передачи возбудителя от больного человека здоровому. Во-вторых, проверяется эффективность проводимого лечения. Третий ответ, «вытекающий» из результатов ПЦР — время, необходимое для терапии гепатита С.
Определяет ли ПЦР генотип и квазитип вируса
Вирусам свойственно быстро мутировать. Возбудитель гепатита С — рекордсмен среди них. Пытаясь остаться незамеченным иммунной системой человека, патоген меняет генетический набор. Его вариаций у гепатита С 11. Официально признаны 6. Прочие Всемирная Организация Здравоохранения не фиксирует, поскольку ещё не выявлены возбудители.
У каждой разновидности гепатита С имеются подвиды. Их именуют квазитипами. Первичные же вариации называются генотипами.
Для успешной борьбы с гепатитом С важно знать, какой именно генотип вируса попал в организм. В каждом конкретном случае применяются разные методики лечения.
Анализ ПЦР гепатита С даёт информацию о генотипе патогена, но не в 100% случаев. Если вирусная нагрузка низкая, определить разновидность возбудителя сложно.
Каждая разновидность вируса распространена в определённых географических зонах, а именно:
- тип 1 в чаще встречается в государствах бывшего Советского Союза,
- тип 2 чаще встречается в Европе и Северной Америке,
- генотипы 5 и 6 редкие, характерны только для некоторых африканских и азиатских стран.
Исследование ПЦР в лабораториях направлено на выявление типов, распространённых в конкретном государстве. Поэтому порой выдаётся результат «не типируется». В этом случае, а также при низкой вирусной нагрузке, желательно пройти повторное исследование в лабораториях с более чувствительной аппаратурой.
Когда проводят ПЦР
К каждому медицинскому исследованию должны быть показания. По крайней мере, это касается обслуживания по полису обязательного медицинского страхования. Врач назначит цепную реакцию (или ПЦР) для диагностики гепатита, если имеются подозрения на воспаление печени.
К его симптомам относятся:
- Общая слабость. Пациент быстро утомляется. Слабость ощущается во всех органах и системах, постепенно нарастает.
- Чувство тяжести в животе. Наблюдаются болевые ощущения в области правого подреберья.
- Отсутствует аппетит. Пациент чувствует тошноту.
- Желтуха. Проявляется на острой стадии гепатита примерно у 70% больных.
- Сосудистые звёздочки на кожном покрове. Обычно появляются возле пупка.
- Боли в суставах. Напоминают ломоту при гриппе.
Качественный анализ проводят всем, при возникновении подозрений на гепатит при условии наличия должного оборудования. Количественную реакцию делают при подтверждённом диагнозе при начале лечения для определения метода терапии. Проводят анализ и во время лечения, дабы определить эффективность выбранного курса и сроки его окончания.
Подготовка к анализу
ПЦР-тест, как и любое медицинское исследование, проводится по правилам. Требования есть как к медицинским работникам, так и пациентам.
К сдаче проб нужно подготовиться:
- перед сдачей анализа необходимо голодать 8—12 часов, поэтому исследование проводится утром,
- неделю до посещения процедурного кабине нужно придерживать диеты, отказавшись от жирных, копчёных и солёных блюд, алкогольных напитков,
- за неделю до ПЦР прекратить курить,
- за сутки до сдачи проб нельзя проходить рентген, флюорографию, ультразвуковое исследование,
- пациентки во время менструации не проходят анализ ПЦР на гепатит С,в связи активной гормональной перестройкой.
Приём некоторых медикаментов может повлиять на результаты анализа. Поэтому за неделю до ПЦР стоит отказаться от лекарств, а если это невозможно, сообщить о принимаемых средствах врачу.
Повлиять на результаты ПЦР могут также любые заболевания, в острой или хронической форме. Поэтому об известных диагнозах тоже сообщается доктору.
Расшифровка результатов анализа
Когда врачи расшифровывают результаты ПЦР, они определяют отклонения от нормы, получают данные о типе вируса.
Лаборатория выдаёт бланк, в котором указывается следующая информация:
- Обнаружен или нет вирус. Как правило, пишется «найдено» и «не найдено». Если речь идёт о качественном анализе ПЦР, это единственные данные на бланке.
- При количественном исследовании указывается уровень вирусной нагрузки. Прописывается число РНК-фракций на один миллилитр крови. Высокий уровень концентрации возбудителя гепатита — более 800 тысяч МЕ.
- В результатах анализа указывается генотип вируса гепатита С. Если определить подвид патогена не получилось, выдаётся результат «не типируется».
- Указывается в бланке и название проведённого теста.
В некоторых лабораториях расшифровку дополняют другой информацией. Это зависит от оснащённости учреждения, его специализации.
Стоимость ПЦР
На анализ крови ПЦР цена определяется множеством факторов:
- престижностью лаборатории,
- характером учреждения – в государственных клиниках за анализ берут меньше, нежели в частных,
- сложностью исследования, так, количественный анализ дороже качественного.
Цена анализа ПЦР на вирус гепатита С варьируется в пределах от 400 до 11 тысяч рублей.
Исследование сложное, поэтому не стоит забывать о сроках. Обычно результаты анализа ждут от нескольких часов, до восьми дней. Скорость, как правило, зависит от объёма проделываемой лаборантами работы, типа аппаратуры. На изношенной и устаревшей технике в некоторых государственных клиниках анализ делают дольше.
(Пока оценок нет)
Загрузка...